���. ���������:

   28-Sep-2000
 

��� ��� ����, 16(6), ���������-���������� 1999, 580-589

���������� �������

��������� ��� ��������� bcl-2 ��� bax �� ��� ��������
��� ��������� ��� �������� ��� ��������

�. �����������,1 �. ������������,1 �. ��������2
1����������������� ����������, ���� ��������� ����������
2������ �������� ����������� ����������, ���������� ������� ��������


������ �� ����������� bcl-2 ��� �� ������� bax ��� �� ���������� ���������� ���� �������� ������� ��������� ���� ��� ������� ��� ���������. ������ ��� ������� ���� � ���������� ��� ������ ��� ��������� bcl-2 ��� bax ��� � ����� ���� �� ��� �������� �� 81 ��������� �������� ��� ��������.
�����-������� �� 60 ����������� ������������ ���������� ������������� 19 �����������, 16 ������������, 10 ����� �����������-������������ ��� 15 ������������ ���������. �� ��������� 21 ����������� ��������� �������� �� ����������� ���������. �� ��������� bcl-2 ��� bax ����������� ��������������� ��� �� ������������ ����������������� �� �� ����� ���������� Histoscore (HSC), ��� ������������ ��� �� �������� ��� ������ ��� �������� ������� �������� (1�4) �� �� ����� ������� ��� ������ (1�3). �� ���������� ������� ������������ �� ��� ������� in situ �������� ��� ������� ������������� ��� DNA (ISEL) �� ����� ��������� ��� ������������ � ����������� ������� (��).
������������
� �������� bcl-2 ����������� �� 58% ��� �����, ��� ��������� 32 (53,5%) ����������� ��� 15 (71,5%) �� ����������� ���������. � �������� bax ����������� �� 65 (80%) �������� ������, ��� ���� ������� 50 (83,5%) ���� ������������ ��� 15 (71,5%) �� ������������. �� bcl-2 HSC ���� ��������� ��� �� ����������� (4,95) ��� �,�� ��� ����������� (2,76) ��������� �� ����� ����������� ��������� (P=0,02). ���� ����� �� bax HSC, ��� ������� ����������� ��������� ������� ������ ������������ (5,91) ��� �� ������������ (5,58) ����������. ��������, 45 ��� �� 81 (55,5%) ��������� ������������� �������� ������������ ������� �� ��� ������� ISEL. �� ����������� ��������� ����� ��������� �� (5,7%) ��� �,�� �� �� ������������ ����� (1,92%) ��� ���� � ������� ���� ����������� ��������� (P=0,03). �� ��������� ������� ������� ������� ������������ ��� ������������ ��������� (6,81%), ������������� ��� �� ������������ (5,57%), ����������� (5,51%) ��� ����� �����������-������������ (4,59%) ���������. ������������ ���������� ����� ��� �� �� ��� ������� ��� ��������� bcl-2 �� ����� ������ ���� ������ ���������� ��� �� ����������� ��������� ����� ���� ��� ������������ ��������� (P=0,02). ��������, � ������ ��� ��������� ��� ������ �� ���������� �� ��� ������� ��� ��������� bax.
������������
� �������� ������ ������ ��� ����������� ���������, �� ����������� ��������� ������� ��� �� �� �����������. � ������� ��� ��������� bcl-2 ����� ���������� �� �������� �� ���� ��� bax ���, ��������, ����� ����������� ��������� ��������� ��� �� ����������� ��������� ��� ����������� ���������� ����� �� ��� ���������� ������. �� ������������ ���� �������� ��� �� ������������ bcl-2/bax ���������� ��� ������� ��� ����������� ���������� ��� ��������� ��� �������� ��� ��������.

������ ����������: ������� ��������, ��������, bax, bcl-2, �������.

� �������� � ������������������ ���������� ������� �������� ��������� �� ����������� ��� ��������� ��������������, ��� ��������� ��� ��� ������ �������.1�4 ������ �� �������� ������������ ��� ����������� �����������, ������������������� ��� ��� �������������� ����������.5

���� ���������� ��������� ������ ����������� �������� �������, �� ���������� �������� ��� ������ ����� �� �������� ��������� ��� ���������� �� ������ � �� ��� ��� �������� ���� ��� ��� �������� ���� �����������. ����� ��� �� ������� ���� ����� ������� ������ �������� ����� ������ �����, ������� ��� ���������� ��� �� ������� ����������� ���������� ��� ��������� ����� ���������� ���� �� �������� ��� ��������. ��� ��� ��� ������ ����������� ��� ������� �������� ����� ���� ��� ������������ bcl-2. H bcl-2 ����� ��� �������� 24�26 kd, ��� ����������� ������ ���� ��������� �������� ��� ������������ ��� ������������ ������ �� ��������� ������� �������������� ������������� ��� ������ �������.6 � bcl-2 ������� ��� ��������� ��� ������������� ������, ������������� ��� ��������,7 ��� ��������� ��� ������� ��� ������������, �� ���������� �� ������������ � ��� ��� ��������.8 ��������� ������� ����� ������ ��� � bcl-2 ���������� ��� ������ ��� ������������ c ��� �� �����������,9�10 �� ����� ���������� ��� ��� ������������ ��� ��������/ICE ���������, ��� ����� ����������� ���� ��������.11

����� ������������ ������ ����� ������� ��� bcl-2, �������� ��� �� ����� (bcl-xL, mcl-1 ��� ced-9) ����������� ������ ��� ��������, ��� ���� (bcl-xS, bad, bak ��� bax) ��� ���������. � ������� ��������� ������ ��� ���������� ��� �������� ��� ������ ��� bcl-2 �������� ���� ��� ���� ������� ������������ ����������� ��� ����������� ���������� �������.12,13

� ba� (bcl-2-associated protein X) ����� � ����� �������� ��� ������� �� ��������� �������� �� ��� bcl-2 �� ��� ���������� ������������� ��������.14 � bax ������ �� �������������� �� �� ���� �� ����� (����������) � �� ��� bcl-2 (������������) ��� ���� �������������, �� ��������� ��� �������� ��� ��������.12,15 ��������, ���� � bcl-2 ����� �� ���������, �� ��������� ��� ���������� ��� �� ������� �������������� ��� ��� ��������� ������. ��������, � bcl-2 ���������� ��� ��������, ����� ���������� ������ ��� ���������� ��������������� ��� �������� �������� ��� ���������� ����� ��� bax �� �� ���������� bcl-2/bax ������������.15 � ��������, ��������, ��� bcl-2/bax �������� ��� �������� ��� ������� �� ������ ���� �������� �� �������� �� ��� ���������� ��������.16 ������ ������� ��� ��������� bax ��� ������� ������������ ������ ��������� ��� ��������� ���� ������� ��� �����,17 ��� �������� �� ���������� ��� bax ����������� ��������� ����������, ���� ��������� ��� ������ ��� ���������� ��������.18 �� �������� ���� ����������� ��� � bax ������ �� ������ � �� ���������� ��� ��������� ������ ������� �� ��� ���� ��� �������� ��� ����� ����������, �� ��������� �� ��� �������� � ������������ ��� ����� ����� ��� ����������� bcl-2. ������� ������ ��� bax ������� ��� ���������� ��� ��������19 ��� ������� ����� ���������.20 ������� ��� mRNA ��� ��� ��������� bax ����� ������ ��� �� ����� ���� ���������� ������ ����� ������ �� ����� �� ��� bcl-2, �������� ��� ���������� ��� � bax ���� ��� ����� ����������� ����� ��� ��� �������� ��� ������ ��� bcl-2.21,22 ��� ����������, � bax ���� ���������� ��� �������� ����� ��� �� ���������������� ������� p53, ���� ������������ �������������, �� ������� ��������� ���� ����������� ��� ������� �� ������ ������ ���� ���� ���������� �������� ��� �������� ���� ��� ������ ���� �� ���������� ��� ��������� ����� ��� DNA.23

�� ��� �� ����� ��� ���������� ��������� ��� ��������� �� �� ����������� ����������� ����� ��������������, ����� ������� �� ������������ �� �������� � ������� ����������� �������� �� �� ������ �����������. � ��������� ��� ����������������� �������������������� DNA �� ��� ������� ��� in situ �������� ��� ������� ������������� (ISEL)24,25 ��� � ��������������� ���������� ��� ��������� ��� �������� bcl-2 ��� bax ��������������� ��� ����������� ���������� ��� ������� ��� ���������. ���� ������ �� ��������� ���������� ����������� ���� ��� ��� ���������� ��������� ��� �� ������� ��� ���������. ��� ��������� ��� �������� �� ��������� ���� ��������� ����� ������������, ��������� ��� �� ���������� ������� ����� ������������� ��� ����� ��������� ���������� �����������.

� ������ ��� �������� ������� ���� � �������� ��� ���������� ��� ����������� ��������� ��� ������������ bcl-2 ��� ��� �������� bax ��� � ��������� ���� �� ��� ���������� ��������� ��� ���������� ��� �������� ��� ��������.

����� ��� �������

�����������

����������� 81 ������������ ����������� ���������� ���������, ��� �������������� ��� �� ������ ����� �������� ��� ������������������ �������� ��� ���� ��. ����������. � �������� ��������� ���� ���������� ������ ��� ��������������� ������� ��� ���� ��� ���������������� �������. ��� ��� ��������� ������ ����������� ����������, ���������� �������� ����������� ��� ����������� �����������. �� 60 ����������� ������������ ���������� ������������� 19 �����������, 16 ������������, 10 ����� �����������-������������ ��� 15 ������������ ���������, ��� �� ������ 21 ��������� �������� �� ����������� ���������. ��������, ����������� 3 �� �������������� ��������� ���� �������� ��� ����� ����������. ������� ����� ��� ���� �������� ���� ������ ��� 36 ��������. � ����� ���� ������� ���� 49,93 (����� 14�73) ��� ����� ������ ��� 44,37 (����� 18�65) ��� ���� ��������. ��� ����������� ���������, �� ������� ��� ����������� ��������������� ���������������� ������� ���� ���� ������ �������� ���� ��� ���� ��� �������. ���� ������� �� ����� �����������-������������ ������� ������ ��� �������� ��������� ��������� ����� 1. ��������, ��� �������� �� ������������ ��������� ����� �������� Nelson, ��� �� ��������� ��� ��� ���� ����� ����� ���������� �� ���� Cushing. �� �������� �� �� ����������� ��������� ��������� ������ ����������� ��� ������� ����������.

�� ������� ��� ����� ���� ������ �� 77 �����������. ����� ��� ���� 56 ������������� ������ ���� ��������������, �� ������� ���� ��� 1 cm, ��� �� ��������� 47, ���� ��� �� 21 �� ������������ �����, ���� ��������������. ����������� ��� ��������� �� ������������ ����� ��� ������� �� �����������, ������������ ��� ����� �����������-������������ ��������� ���� ��� �� ����������� �������� ���� ���������� �� 27 �����������. ��� ������, 23 �������� ����� ����� �������������� �����. �� �������� �� ��������� ��� ������������ GH ����� ����� ������� �������������� (����������), ��� ����� ��� ��������� PRL ����� �������������� �� ��������� ��� ���������� (������ �������������).

���������� ������

��� ��� ���������� ������, � ����� ��� �� ������� ��� ���������� ���� ��� ��������, �������������� �� ������� 4% ��������� ��������, ����������� �� �������� ������������� ��������, ����������� �� ������ ��� ��� �������� ���������� ��� ����������� �� ��������. ����� ������ 4�6 �m ������������ �� �������� ������������ �� ����� Vectabond (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) ��� ��������� �� ������������-������ ��� �� ��� ���������� ������ PAS.

��������������� ������

��� ��� ��������������� ������, ��������������� � ������� ������� ��� ������������ ��������-��������-������������� (ABC) �� ����� ��������� (Elite Vectastain ABC, Vector). ���������������� ������������ �������� ������ ���� ��� ������� ���������������� ������� � ��� �- ��� �-���������� (SU) ��� ���������������� �������: GH (1:4000), PRL (1:3000), ��������������� (ACTH, 1:2000), �-��������������� ������� (�-TSH, 1:2000), �-������������� ������� (�-FSH, 1:2000), �-������������ ������� (�-LH, 1:2000) ��� �-SU (1:2000). ��� ��� ���������� ��� ���������������, ��� ��� ��������� ��� ������ �������� �� ����� ���������� �� 0,25 mg/mL ������� �������� (Sigma Co, St. Louis, MO, USA) ��� 5 min, �� ����������� ��������.

��� ��� ��������������� ������ ��� �������� ��� ��������� bcl-2 ��� bax, ���������� ������ ���������� ����������� ��� ����� ��� ��� ���������� ��� ���������������, �� ������ ���� �� ������� 0,2% �������� ����� �� PBS (pH 6,0) ��� 1 min �� ����� �������. ��� ��������, ��������������� ����������� �������� ������ ��� ��������� bcl-2 (1:350, ������ 124, DAKO, Copenhagen, Denmark) ��� ������������ �������� ������ ��� ��������� bax (1:1500, Pharmingen, San Diego, CA, USA). �� ������� �������� ��� ��� bcl-2 ���������������� ������������ ���������� ��� ������ � ��-Hodg kin ������� ��� ��� ��� bax ����������� �������� ������� ����� ��� ��������� ��������� ������.

� ��������������� ������� ������������ �� ����: ������������ ��� ����� �� ������������� �� ������� 56 �C ��� 12 ���� ��� ������, ��������� �� ��������� ������������� �������� ��� ��������� �� ���� ������, ����������� ��� ��� PBS (phosphate buffer saline, pH 7,6). ���������� ������������ ��� ������ ��� ���������� ������������� �� ������ �� ������� 3% �22 ��� 20 min �� �������� ������, ��������� �� PBS ��� �������� ��� ����������� ����������� ��� ���������������. �� �����, ���� ���������� �� PBS, ���������� ��� 20 min �� ��� ����� � ��� �����, ��� ����������� ��� ����������� ���������� ����������, ��� ���������� ������ ��� 16 ����������� ���� �� �� ����� ��������, ����� 4 �C �� ���� ����������. ����������� ���������� ��������� �� PBS ��� ������ �� �� ����������� �� ������� ������������ �������� ��� 40 min ��� �� �� ������� ������������ ��������-��������-������������� ��� 30 min. ��� ��������, �� ����� ���������� ��� 4 min �� ������� 0,06% ���������� 3,3-����������������� (Sigma) �� PBS ��� 1 �L/mL H2O2, ��� ����� ��� ������ ���� ����� ���� ������ �������� ���������-�����������. �����, ���������� ��������� �� ������������ Harris ��� 2 min, ������� ���������, ��������, ��������� �� Eukitt (O. Kinder Gmbh & Co, Freiburg, Germany) ��� ��������� ��� �����.

����������� �����������

��� ��� ���������������� ������, ���������� ������������� ��������� ������� 0,2�0,3 cm ��� �� ���� ����� ��� ���������� ��������������� �� ������� 2,5% ���������������, �� Sorensen�s buffer ��� 24 ����. ��� ��������, �� ������������� ���������� �� Sorensen�s buffer ��� 40 min, �������������������� �� ����������� ��� ������ �� �������� ���������� ��� 1 ���, ���������� �� Millioning�s buffer ��� 40 min, ������������ �� ��������, ������������� �� ������� ��� ����������� ��� ����������� �� ����� �������� ������� (Epon-Araldite). ��������� ����� ��� ���� ������ ��������� ��������� �� 1% ������ ��� ����������� ��� ����������� �� ������ ����������� �� ���������� ������ ��� ���������������� ������. ���������� ����� ��� ���� ������������ ������ ��������� ��������� �� ����� ��������� ��� ������� �������. � ������ ��� ����������� ����������������� ������ ����� �� �� ����� ������������� ������������ ����� Philips 410LS � JEM-100CX2 (JEOL Ltd, Tokyo, Ja pan). ������������ ��� ��� �������� �������� ����� ���������� �� ����������� ������.26

� ���������������� ������ �������� 5 �����������, 3 ������������, 3 ����� �����������-������������, 5 ������������ ��� 13 �� ����������� ���������. �� ��������� ������������� 8 ����������� ��������� ��� 4 ��������� null ��������, ��� �� ����� 4 �������������.

������ ��� ���������

� ��������������� ���������� �������������������� ��������������� ��� DNA ��� ����������� �������� ���������� �� �� ������� ApopTag (Oncor, Gaithersburg, MD, USA), �� �� ����� ��� �������� in situ �������� ��� ������� ������������� ��� DNA (ISEL). ����� ��������� ������ 5 �m, ���� ����������������, ������������ �� �������� ��� ���������� �� ����������� ����, ���������� �� 60 mg/mL ������� ����������� � (Calbiochem-Novabiochem, La Jolla, CA, USA) �� ����������� �������� ��� 15 min. ���������� ������������ ��� ������ ��� ���������� ������������� �� ������� 3% �22 �� �������� ���������� ��� 15 min ��� ������� �� PBS. ��� ��������, �� ����� ���������� �� �� equilibration buffer, ���� ���������� �� �������� ����������, �� ����������� �������� ����� 20 min, ��� ��������� �� ����� 1:3 ������� ������� ������������ �� reaction buffer ����� 37 �C ��� 1 ���. � ��������� ������������ �� ������������� ������� ��������� (stop/wash buffer) ����� 37 �C ��� 30 min. �� ����� ���������� �� PBS ��� ���������� �� ��������� ����-�������������-������������� �� ���� ���������� ��� 30 min, ���� ���������� �� �������� ����������. ����������� ��������� �� PBS ��� �������� ���������� 0,06% ���������� 3,3-����������������� �� PBS ��� 1 �L/mL H2O2, �������������� �� 1 mg/mL ��������� ������� (Sigma). �� ��������� ��������� ����� ����� ���� ������ �������� �� �� DNA. ��� ��������� ��������������� ������� 2% �������� ��� �������� �� ����� ������ �� �������� 10% ���������� ������ ����� (������ pH 4,0) ��� ���������� �������, ������� ��������� �� ��������, �������� �� ������, ��������� ��� ��������� ��� �����. ������������ ���������� ��� �������� ����������� ������ ������� ���������������� �� ������� ��������, ��� ����� ���� ������ �� ������� ��� ������� ������������ �������������� �� reaction buffer, ���������������� �� ��������� ��������.

���������

� ��������������� ������� ��� ��������� bcl-2 ��� bax ���������������� �� �� ����� ���������� Histoscore (HSC), ��� ���������� ��� 0 ��� 12 �������, ��� ������������ ��� �� �������� ��� ������ ��� �������� ������� �������� (0�5%=0, 5�25%=1, 26�50%=2, 51�75%=3 ��� 76�100%= 4) �� �� ����� ������� ��� ������ (1=����, 2=������ ��� 3=������ ���������������). ����� �� ������� ����������� ����� ��������������, �� ���� ������������, �� ������� ������������ ������ �������27 ��� ��-Hodgkin ����������.28

��� ��� �������� ��� ����������� ������ (��) �������������� �������� ���� ����� �� ������ ��������� 400� ��� ����������� ����������� 500 �������. ������� ���������� ���� ������� ��� ���� ������, ������� � ������ ���������� �� �������������� ������ ���������, ���� ��������������� ��� ���������� � ��������������� �����������. ��� ��� ������� ������������ ���� ��� ������������ ��� ��� ����������� ��� ����������� ��������, ������������ � �� ��������� �������� ������� ��� ���� ���������� ��������. � ������� ���� ���� ��� ��������������, �� ������������� ������������, ���� �������� ��� ����� ��������� �������, ���� � �����������������.29 �� ������ ������ �� �������� ��� � �� ��� �������� ������ ������������ ��� ������ ���������, ���� ����� ���� ������ �������� ������� �������� ������� ����� ��������� ������ ��� ����������. �� ��������� ������ ��� ��� ������������ �����������, ��� ��������� �� ����������� ���� ��� ����� ��� � �� ���������� �� � ����� ���� ��� �������� ��� ������� ���� �� ������ ��� ������� ��� ����������.

���������� �������

��� �� ���������� ������� ��� ������������� ��������������� �� Student�s t-test ��� �� Pearson product moment-correlation test. ����� P ���������� ��� 0,05 ���������� ����������� ����������. ��������, ������������ � ����������� ��������� k ��� �� ����� ����� ������� ����� ��� �����������.

������������

�� �� ������ ����������� ������������� �������� ��������� ���������� �������, ������� �������� ��� 1% ��� ���������� ���������. �� ������� ���� ��������� �������� ��� ���������� ����� �� ���������� ��� ����������� ��� ����������������, ������� ��� ��������������� ��� ����������, �� ���������� ��� ��������������� ��� DNA. �� ����������� ������, ���� ������� ��������������� ��� ������� ��� ������������� �������� �� �� ����������� ������� ��� ��� ���������� ����������� �������� (���. 1). �� �� ����������� ����������� �������������� ������� ����������� ����������, ���� ������� ��� ��������� ���������� �� ��������������� ������������, ������������ ��������, ������� ���������� �������� ��� ����������� ������������������ ���������� (���. 2). ����������� ������ ��������������� ��� ���������� ����������� �������� ��� �������� ������������� ��������� ��� ������������ ��������.

� ��������������� ��� bcl-2 ��� bax ����������� ��� ������������� ��� ��������, ���� ��� ����������� ������������, ��� ��� ��� ���������. ��������, � �������� bcl-2 �������� �������������� ������������ � ������������ ������������ �������� (Golgi pattern) (���. 3). �� ��� � ��������������� ���� ����������, � ������ ��� ������� ���������� ���������� (���. 4). � �������� bcl-2 ����������� �� 58% ��� �����, ��� ��������� 32 (53,5%) ����������� ��� 15 (71,5%) �� ����������� ���������. ����������, ��������������� ��� bcl-2 ������� �� 10 (52,5%) �����������, 10 (62,5%) ������������, 5 (50%) ����� �����������-������������ ��� 7 (46,5%) ������������ ���������. � �������� bax ���� ������� ����������������� �������� ��� �� ������� ����������� ���� ��������� ������ ���� ����� ��� ���������� ��������� (���. 5). � �������� bax ����������� �� 65 (80%) �������� ������, ��� ���� ������� 50 (83,5%) ���� ������������ ��� 15 (71,5%) �� ������������ ���, ����������, �� 13 (68,5%) �����������, 15 (94%) ������������, 8 (80%) ����� �����������-������������ ��� 14 (93,5%) ������������ ���������. �� bcl-2 HSC (���. 1) ���� ��������� ��� �� ����������� (4,95) ��� �,�� ��� ����������� (2,76) ��������� �� ����� ����������� ��������� (P=0,02). ��������� ����������� ���������� �������� ��� bcl-2 HSC �������� ������ �� ������������ (4,95) ��� ������������� (1,2) ���������� (P=0,002), ����� ��� ������ ������������� (3,56) ��� ������������� ���������� (P=0,01). ���� ����� �� bax HSC (���. 1), ��� ������� ����������� ��������� ������� ������ ������������ (5,91) ��� �� ������������ (5,58) ����������. � ���������� ������� ��� �������� ��� bax ����� ��������� ������ ������������ ���������� ������ ���������� ��������� bax HSC ��� ������������ (6,98) ��� �,�� ��� ����������� (4,40) ��������� (P=0,05).

��������, 45 ��� �� 81 (55,5%) ��������� ������������� �������� ������������ ������� �� ��� ������� ISEL, ��� �� ����� 39 (65%) ��������� ������������� ��� 6 (28,5%) �� ������������� ������. ����������, ��� ���� ������������� ������, ���������� ������������ �� 14 (73,5%) �����������, 11 (69%) ������������, 5 (50%) ����� �����������-������������ ��� 9 (60%) ������������ ���������. ���� �� ����� ���������� ������������� ����������� ������ ����������� �������� �� ������� � ��������� �������� (���. 6). � ����������� ��������� k ���� �������� ��� �� ������ ��� ��� ����������� ����������� ���� 0,87. ��� ���� ����� �� ������������ ����� ������������� ������ ���������� (���. 1). �� ����������� ��������� ����� ��������� �� (5,7%) ��� �,�� �� �� ������������ ����� (1,92%) ��� ���� � ������� ���� ����������� ��������� (P=0,03). �� ��������� ������� ������� ������� ������������ ��� ������������ ��������� (6,81%), ������������� ��� �� ������������ (5,57%), ����������� (5,51%) ��� ����� �����������-������������ (4,59%) ���������. � �� ���� ����� ������������ ���������� ������� ��������� ��� ��� �� ��� �� ������������ ����� ��� ���������� ����������� ��������� ������� �� �� ������������ ��������� (P=0,02). ��������� �� �� ������� ��� �����, ���������� �� ������������ ��� �������������� (8,7%) ��� �,�� ��� �������������� (5,58%) ��� ������ ��� ������������ �����, ���� �� �������� ����� ��� ���� ����������� ����������. �������� ������ ���������� ��� ��������� GH � ��� PRL �� �������� �� � ����� �������������� ������������ �������� ��� ������ ������ ���������� ��������, �� ��� ������������ ���������� �� ��� ��������� ������� ����� �������� ���, ����������, ��� ������������ (���. 2). �����, ��� ������������� ���������� ������� ���� �� �������������� ������������ ��������� ��� ��� �� ��� ���������� ������������ ��� ��������������� ��� ����� ��� ����������.

������������ ���������� ����� ��� �� �� ��� ������� ��� ��������� bcl-2 �� ����� ���� ������ ����������, ����� ��� �� ������������ ���������, ��� ������� �� ����������� ��������� ����� ��� ������������ ��������� (Pearson product moment correlation, r=-0,59 ��� P=0,02). ��������, � ������ ��� ��������� ��� ������ �� ���������� �� ��� ������� ��� ��������� bax.

��������

��� ������ ������������ ���������� ������������� ������� ������� ��� �������� ��� �������� ���� ������� ��� ���������� ������ �� ������ ���������������� ��������30�37 ��� ��������� ���������.38�41 ��������� �� �� ���������� ��������� ���� �������, � ������� ��� � ������� ��� ��������� ��������� �� ��� �� �������� �������.42,43 In vivo ������������ ������� �� �������� �� ���������� ������������� �������� ����������� ���� ��� �������� �����������, ������� ������ ��� ��������� ���� ��� �������� ��� �����������.38 �������� �������� �������������� ��������� �� ����������� ��� ������� ��� ����������� �������� �� �������� �� ��� ����� ��� ��� ����� ������������ �����. �� ���������� �������� ��� �� ��������� ��� ��������� ���������� ������ �� ������� ��� �������� ��� �� ���������� ��� �������������� ���������� ��� ����������� �������� ��� �������������. �� ��� ���� ������, ��������������� ��� ������� ISEL, ������� ��� � ������������� ������� ��� �������� ��� ����������� ������� ���������� (GH1) ��� ���������30 ��� ��� ������������ ������� ���������� (AtT-20) ��� ��������.31 �� Yonezawa et al40 ������ ��� � ������������� ��� � ����������� (terguride) ������� �� ������������ ��� ��������� �������������� ��� �� ������� ��� �������� ���� ������������ ��� ������� Wistar ���������, ���� ��� ������������ ��������. ���� ���������� ������ ��� �� ������� ��� �������������� SMS 201�995 ���������� ��� ��������� �������������� �� ��� ������� ��� ���������, ��� AtT-20 ���������� ������� ��� ���������� �� �����������������, ����� ����� ��� ��������� ���� G1 � G2 ���� ��� ������.32 ���� �������� ��� � ������ ��� c-myc, ��� �������� � �������������, ����������� �� �������������� ��� ��������� ��� ������� ��� ��������� ����������, ������ �� ������ ������ ���� ���� ������� ��� ���������.33 ��������, �������� ����� ���������� ������� �� ����� ���������� �� ���������� ������ ����������� ����������, ���� � ���������� ��� ����������� ������� C ��������� (hypericin) ��� AtT-20 ��� GH4C1 �������,34 ����� ��� �� ���������� ��� ���������� �������/��������� �������� ��� (okadaic acid) ��� ����������� � (calyculin A) ��� GH3 �������.36,37 �����, �� Guo et al,39 �� ������ ��� ��������� ��������� ��� ������������ �� ������� ���������, ����������� �������� �������� ���� ��� �������� ��� ������������ ��������, ���������� ��� ���������� ��� � ������������������ ��� ���������� ��� ������� ��� �������� ��� �������� ��� ����� in vivo ������ �� ��������� �� ������ ��������� ��������.

�� Green et al,42 �� ��� ������� ISEL, ����������� �������� ��� ��������� �������� ��� �������� ��������� �� �� ������������� ������, ���� ����� ����������� ���������� �������� ��� ���� �������������. ��� ������ ���� ��� ������������ ����� ��� ��������� �� ��� ������� ��� ��������� p53, ����� ��� �� �� ������� � ��� ���� ��� ����������.

�� ������������ ��� ��������, ��� ��� ������������ ������� ���,43 ������� �� �� ��������� ��� ��������� ��� ��������� �������� ��� ��������, �������� ��� � �������� ������ ������ ��� ����������� ���������, �� ����������� ��������� ������� ��� �� �� �����������. ����� ������ ��� ��������� �� �� ����������� ��������� �������� �������, ���� ������� ������ ���������� ���������������.44�46 �� ������������ ����� ��������� �� �� ����������� ��������� ��������� �� ��� ������������ ��� ����������� ��������� ��� ����������� ��� � ������ ��� ��������� ��������� ��� ��� �� ����� ��� ���������� ���������������.

� ���������� ����������� ������� ��� ������������ ��� ������������ ��������� �� �������� ������� �� �������� ���� ����� �������� ��� ����������������� ��� �������������� ���� ������������ ACTH. �� � ������� ���� ����� ������, ��������� �� ���� ������ ����� ������� ��� ������������� ����������45�47 �� ���������� ��������� ����������� ��������������. ������ ��������������� ��� ��������������� ��� ������� ����������� ��������� �������, �� ��� ������������ ���������� �� ��� �����. �����, ���������� �� ������������ �� ��������� ������� ��� ��� ����� ����� �������������� �������� ��� ���������� ��� ������������, ����� ���� ����������� ���������� �������� �� ��� ����� ������� ��� ����� ��������� �� ��������. �� �������� ����� ������ �� ��������� ���� �������� ���������� ������������, ��� ����� ��� ���������� ���� �������� ��� ������ ������ ��� �������� ��� ������������� ������. �������, �� ���������� ����� ��� ���������� ����� ��������� ����������� ���� �� ������� �������� ��� ��������� ��� ��� ������ ��� ��������� ����� ��� �������� ��� ����� ��� ��� ����������� ����� ���� ����.

�� ������� ��� ������� ��� ������� ��� ��������� bcl-2 ��� ��������� �������� ����� ��������� ��� ������ ������������. ���������������, ������� ��� � ������������ bcl-2 ���������� ��� 30% ��� ����������� ����������.48 ���� ������� ������, � ��������� �������� ��� bcl-2 ���� 58%. �� �������� ����� ������� ����������� ��� ����������� ���������� ����������� ��� ���������������, ��� ����������������. �� Woloschak et al,35 ���������� �� ������������ ��� ������ ��� DNA ���� ��� �������� �-������������ �� ����� ����������� �������� �������� (AtT-20), ������ ������� ���� ������ ��� ���������� ������, ���� ������� ��� ��������� ��� ���� ������� ������� ����������� ���������� ��� ���������� �����, ���� � p53, �� c-myc ��� � bcl-2. ����������� �������� ��� ��������������� ��� �tT-20 �������� ���� G1 ��� G2 ������ ��� ������ ��� ��� ��������� ������� ����� ���������� �� ��������. � �������� ���� G1 ���� ��������� �� ������ ������� ��� ��������� p53, ��� � ������� ��� c-myc ����������� �����������. � �������� ���� ���������� ��� ��� ������� ��� �������� bcl-2 ��� ������� ����, ������� ���� ��� ������ ������� ����� �������� ��� bcl-2 ���� ��������� �����. �����, �� Ahlbom et al,41 ���������� ���� ����������� ��� ������������� ���� ��������� ��� ������������ ����������� ��� �������� ����� ��� �������� ��� ��������� ���� ��� �������������, ����������� ��� �� ��������� ���� ����������� ���� ����������� ����������� ��� ����������� ��� ������ ��� ��������� p53 ��� bax ��� �������� ��� ��������� bcl-2.

���� ������� ������, �� ��������� bcl-2 ��� bax ������� �������� �������� ��� ������ ����������� ����� �������� ��� �� �������������� �������������. ��������, ��� ��������� � ��������� ��� bcl-2 ���� ���������� �� �������� �� ���� ��� bax. �� HSC ��� ��������� bcl-2 ��� �� ����������� ��������� ���� ����������� ��������� ��������� ��� ���� ��� ������������ ��� ���������� ���������� ����� �� ��� ��. �� �������� �� ������������ ���������, �������� ���������� ����� ������� �� ���� ��������� ���� ���������� ��� ��������� ��� ������������, ���� �� �������� ���� ����������� ����������. ���� ����� ��� ������� ��� ��������� bax, ��� �������� �������� ������ ��� �������� ����� ���������� ��� ��� ������ ��������� ��� HSC ��� bax ��� ��� ��.

��������������, � �������� ����� ��������� �� ����������� ���������. ��������, � ������� ��� bcl-2 ����� ��������� �� �� ����������� ���������, ��� � bax ���������� �� �������� ��������� �� ����� ���� ������ ��� ����������. �� ������������ ���� �������� ��� �� ������ ��� ������ bcl-2/bax �������� �� ���������� ��� ������� ��� ��������� ��� ��������� ��� �������� ��� ��������. ��������, � ������ ��� ��������� ������ �� �������� ��������� ���� ��������� ��� ��������� ��� ��� ����������� ���������� ��� ������������� ���� ������� ��� �������������� ���������� ��� ��� ���������������� ��� ����������� ����������.

�����������

�� ���������� ��������� ��� ���������� ����������� ���� ���� ��������� �� ����� �������� ��� ��� �������� ������� ��� ���� ������������ �������.

����� ��������������:
� ���������� ��������� ���� �-52/96 ��� �-53/96
� ������ ��������� ������� ��� �������� (�HPP) ��� ������� ����������� ������ (���), Bethesda, MD, USA

������������

  1. KERR JF. Shrinkage necrosis: a distinct mode of cellular death. J Pathol 1971, 105:13�20
  2. KERR JFR, WYLLIE AH, CURRIE AR. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide ranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer 1972, 26:239�257
  3. ARENDS MJ, MORRIS RG, WYLLIE AH. Apoptosis. The role of the endonuclease. Am J Pathol 1990, 136:593�608
  4. BRUSCH W, KLEIN L, TENNISWOOD M. The biochemistry of cell death by apoptosis. Biochem Cell Biol 1990, 88:1071�1074
  5. KERR JFR, HARMON BV. Definition and incidence of apoptosis: A historical perspective. In: Tomei LD, Cope FO (eds) Apoptosis: The Molecular Basis of Cell Death. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1991:5�29
  6. TSUJIMOTO Y, GORHAM J, COSSMAN J, JAFFE E, CROCE CM. The t(14;18) chromosome translocation involved in B cell neoplasms result from mistakes in VDJ joining. Science 1985, 229:1390� 1393
  7. HOCKENBERRY D, NUNEZ G, MILLIMAN C, SCHREIBER RD, KORSMEYER SJ. Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death. Nature (London) 1990, 348:334�336
  8. KORSMEYER SJ. Bcl-2: An antidote of programmed cell death. Cancer Surv 1992, 15:105�118
  9. YANG J, LIU X, BHALLA K, KIM CN, IBRADO AM, CAI J ET AL. Prevention of apoptosis by bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked. Science 1997, 275:1129�1132
  10. KLUCK RM, BOSSY-WETZEL E, GREEN DR, NEWMEYER DD. The release of cytochrome c from mitochondria: A primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis. Science 1997, 275:1132�1136
  11. LIU X, KIM CN, YANG J, JEMMERSON R, WANG X. Induction of apoptotic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome c. Cell 1996, 86:147�157
  12. REED JC, ZHA H, AIME-SEMPE C, TAKAYAMA S, WANG HG. Structure-function analysis of Bcl-2 family proteins. Regulators of programmed cell death. Adv Exp Med Biol 1996, 406:99�112
  13. FARROW SN, BROWN R. New members of the Bcl-2 family and their protein partners. Curr Opin Genet Dev 1996, 6:45�49
  14. OLTVAI ZN, MILLMAN CL, KORSMEYER SJ. Bcl-2 heterodimerizes in vivo a conserved homolog, Bax, that accelerates programmed cell death. Cell 1993, 74:609�619
  15. KORSMEYER SJ, SHUTTER JR, VEIS DJ, MERRY DE, OLTVAI DE. Bcl-2/Bax: a rheostat that regulates an anti-oxidant pathway and cell death. Semin Cancer Biol 1993, 4:327�332
  16. KORSMEYER SJ. Regulators of cell death. Trends Genet 1995, 11: 101�105
  17. BARGOU RC, DANIEL PT, MAPARA MY, BOMMERT K, WAGENER C, KALLINICH B ET AL. Expression of the bcl-2 gene family in normal and malignant breast tissue: Low bax-� expression in tumor cells correlates with resistance towards apoptosis. Int J Cancer 1995, 60:854�859
  18. KNUDSON CM, TUNG K, BROWN G, KORSMEYER SJ. Bax de ficient mice demonstrate lymphoid hyperplasia but male germ cell death. Science 1995, 270:96�99
  19. YIN C, KNUDSON CM, KORSMEYER SJ, VAN DYKE T. Bax suppresses tumorigenesis and stimulates apoptosis. Nature 1997, 385:637� 640
  20. RAMBINO N, YAMAMOTO H, IONOV Y, LI Y, SAWAI H, REED JC ET AL. Somatic frameshift mutations in the bax gene in colon cancers of the microsatellite mutator phenotype. Science 1997, 275:967� 969
  21. REED JC. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death. J Cell Biol 1994, 124:1�6
  22. YIN XM, OLTVAI ZN, KORSMEYER SJ. BH1 and BH2 domains of Bcl-2 are required for inhibition of apoptosis and heterodimerization with bax. Nature 1994, 369:321�323
  23. WHITE E. Life, death, and the pursuit of apoptosis. Genes Dev 1996, 10:1�15
  24. SCHMITZ GG, WALTER T, SEIBL R, KESSLER C. Nonradioactive labeling of oligonucleotides in vitro with hapten digoxigenin by tailing with terminal transferase. Anal Biochem 1991, 192:222�231
  25. WIJSMAN JH, JONKER RR, KEIZER R, VAN DE VELDE CJH, CORNELISSE CJ, VAN DIERENDONCK JH. A new method to detect apoptosis in paraffin sections: in situ end-labeling of fragmented DNA. J Histochem Cytochem 1993, 41:7�12
  26. KONTOGEORGOS G, KOVACS K, SCHEITHAUER WB, ROLOGIS D, ORPHANIDIS G. �-subunit immunoreactivity in plurihormonal adenomas of patients with acromegaly. Mod Pathol 1991, 4:191� 195
  27. SINICROPE FA, RUAN SB, CLEARY KR, STEPHENS LC, LEE JJ, LEVIN B. Bcl-2 and p53 oncoprotein expression during colorectal tumorigenesis. Cancer Res 1995, 55:237�241
  28. WHEATON S, NETSER J, GUINEE D, RAHN M, PERKINS S. Bcl-2 and Bax protein expression in indolent versus aggressive B-cell non-Hodgkin lymphomas. Hum Pathol 1998, 29:820�825
  29. NEMOTO R, UCHIDA K, HATTORI K, SHIMAZUI T, NISHIJIMA Y, SAITO S ET AL. S-phase fraction of human tumor measured in situ with bromodexyuridine labeling. J Urol 1988, 139:286�289
  30. YIN D, KONDO S, TAKEUCHI J, MORIMUTA T. Induction of apoptosis in rat somatotropin-secreting adenoma cells by bromocriptine. Oncol Res 1993, 5:383�387
  31. YIN D, KONDO S, TAKEUCHI J, MORIMUTA T. Induction of apoptosis in rat ACTH-secreting adenoma cells by bromocriptine. FEBS Lett 1993, 339:73�75
  32. SRIKANT K. Cell cycle-dependent induction of apoptosis by somatostatin analog SMS 201�995 in AtT-20 mouse pituitary cells. Biochem Biophys Res Commun 1995, 209:400�406
  33. SHARMA K, SRIKANT CB. Somatostatin analogs induce c-myc gene expression in AtT-20 mouse pituitary tumor cells. 77th Annual Meeting of Endocrine Society, Washington DC, 1995:276 (Book of Abstracts)
  34. HAMILTON HB, HINTON DR, LAW RE, GOPALAKRISHNA R, SU YZ, CHEN ZH ET AL. Inhibition of cellular growth and induction of apoptosis in pituitary adenoma cell lines by the protein kinase C inhibitor hypericin: potential therapeutic application. J Neurosurg 1996, 85:329�334
  35. WOLOSCHAK M, YU A, XIAO J. Molecular and cellular responses to DNA damage in a murine pituitary adenoma cell line. Mol Cell Endocrinol 1996, 119:61�68
  36. RITZ V, MARWITZ J, RICHTER E, ZIEMANN C, QUENTIN I, STEINFELDER HJ. Characterization of two pituitary GH3 cell sublines partially resistant to apoptosis induction by okadaic acid. Biochem Pharmacol 1997, 54:967�971
  37. TERGAU F, WEICHERT J, QUENTIN I, OPITZ R, VON ZEZSCHWITZ C, MARWITZ J ET AL. Inhibitors of ser/thr phosphatases 1 and 2A induce apoptosis in pituitary GH3 cells. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 1997, 356:8�16
  38. DREWETT N, JACOBI JM, WILLGOSS DA, LLOYD HM. Apoptosis in the anterior pituitary gland of the rat: studies with estrogen and bromocriptine. Neuroendocrinology 1993, 57:89�95
  39. GUO YP, HENDRY JH, MORRIS ID, DAVIS JR, BEARDWELL CG. Cell proliferation and death in the irradiated pituitary gland and its modification by growth stimulants. Int J Radiat Oncol Biol Phys 1997, 38:175�181
  40. YONEZAWA K, TAMAKI N, KOKUNAI T. Effects of bromocriptine and terguride on cell proliferation and apoptosis in the estrogen-stimulated anterior pituitary gland of the rat. Neurol Med Chir (Tokyo) 1997, 37:901�906
  41. AHLBORN E, GRANDISON L, ZHIVOTOVSKY B, CECCATELLI S. Termination of lactation induces apoptosis and alters the expression of the Bcl-2 family members in the rat anterior pituitary. Endocrinology 1998, 139:2465�2471
  42. GREEN VL, WHITE MC, HIPKIN LJ, JEFFREYS RV, FOY PM, ATKIN SL. Apoptosis and p53 suppressor gene protein expression in human pituitary adenomas. Eur J Endocrinol 1997, 136:382�387
  43. KONTOGEORGOS G, SAMBAZIOTIS D, PIADITIS G, KARAMERIS A. Apoptosis in human pituitary adenomas: A morphologic and in situ end-labeling study. Mod Pathol 1997, 10:921�926
  44. IKEDA H, YOSHIMOTO T. The relation between c-myc protein expression, the bromodeoxyuridine labeling and the biological behavior of pituitary adenomas. Acta Neuropathol (Berl) 1992, 83: 361�364
  45. KOVACS K, HORVATH E. Tumors of the pituitary. In: Atlas of Tumor Pathology. Fascicle 21, 2nd series. Washington DC, Armed Forces Institute of Pathology, 1986
  46. KONTOGEORGOS G. Pituitary tumours. In: Polak JM (ed) Diagnostic Histopathology of Endocrine Tumours. Churchill Living stone, London, 1993:227�269
  47. SAEGER W. Morphology of ACTH-producing pituitary adenomas. In: Fahlbusch R, von Wender K (eds) Treatment of Pituitary Adenomas. Thieme, Stuttgart, 1978:122�130
  48. WANG DG, JOHNSTON CF, ATKINSON AB, HEANEY AP, MIRAKHUR M, BUCHANAN KD. Expression of bcl-2 oncoprotein in pituitary tumours: comparison with c-myc. J Clin Pathol 1996, 49:795�797

 


� 2000, ������ ��������� ��������